东方墨點法
东方墨點法()是一个用于稱呼分析蛋白质修饰(包括脂质、磷酸根和糖缀合物的添加)的多种生化技术名称。大多数被称为“东方墨點法”的技术都是将十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶上的磷蛋白印迹到聚偏二氟乙烯或硝酸纤维素膜上。並使用探针分析转移蛋白的修饰,这些探针可以检测脂质、醣類、磷酸化或任何其他蛋白质修饰。东方墨點法是指通过修饰与探针的特异性相互作用来检测目标的方法,这与标准的远端西方墨點法有所区别。从原理上讲,东方墨點法与凝集素墨點法类…
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东方墨點法()是一个用于稱呼分析蛋白质修饰(包括脂质、磷酸根和糖缀合物的添加)的多种生化技术名称。大多数被称为“东方墨點法”的技术都是将十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶上的磷蛋白印迹到聚偏二氟乙烯或硝酸纤维素膜上。並使用探针分析转移蛋白的修饰,这些探针可以检测脂质、醣類、磷酸化或任何其他蛋白质修饰。东方墨點法是指通过修饰与探针的特异性相互作用来检测目标的方法,这与标准的远端西方墨點法有所区别。从原理上讲,东方墨點法与凝集素墨點法类…
電移位切試驗(英语:Electrophoretic mobility shift assay)是一種分子生物學試驗,用来檢測蛋白質有没有和核酸發生親和作用。試驗將没有放入核酸的蛋白質和放入核酸的蛋白質作比較,經過凝膠電泳,體積比較大的分子會移動得比較近,而體積比較小的分子會移動得比較遠。通過觀察分子在凝膠中移動形成的條紋,可以知道蛋白質有没有和核酸發生親和作用。
在分子生物學中,限制性片段長度多態性()具有兩種涵義:一是DNA分子由於核苷酸序列的不同而產生的一種可以用來相互區別的性質;二是一種實驗技術,利用這種性質來比較不同的DNA分子。這種技術可以用於遺傳指紋和親子鑑定。 方法 通常,一個獨立樣本的DNA首先被提取和純化。純化後的DNA可以用PCR反應擴增。隨後,用限制性核酸内切酶切成“限制性片段”,每種内切酶只能切除可被它識別的特定序列。隨後,限制性片段通過瓊脂糖凝膠電泳將不同長度的片段分開…
彗星实验(),又称作单细胞凝胶电泳实验或彗星电泳法(,SCGE)是一种對单个细胞检测DNA损伤的实验技术。彗星实验最初由Östling和Johansson在1984年发明,此后由 Singh等在1988年改进,此后成为了對細胞內DNA损伤与修复、遗传毒性生物监测的最常用的标准实验技术。步驟包括將細胞包覆在低融點的瓊脂糖中, 在中性或鹼性下(pH > 13)溶解細胞, 最後以凝膠電泳將包覆的已溶解細胞分離解析. 之所以稱為彗星, 是指細胞…
膜的蛋白质根据其分子量通过SDS-PAGE分离]] 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(,简称SDS-PAGE)又称 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、莱氏凝胶电泳,縮寫的PA指的就是聚丙烯醯胺(英語:polyacrylamide),不用因為polyacrylamide可縮寫為PAM或PAAM而感到糾結。SDS-PAGE是常用的膠體電泳,利用於生物化學、鑑識科學、遺傳學和分子生物學等領域的分析技術,此項技術的原理,是利用檢體中蛋白質分子量大小的不…
萨瑟恩印迹法,或南方墨點法(),是由英國生物學家埃德温·萨瑟恩於1975年發明,並因此得名,是一種普及的分子生物學實驗技術。目的是偵測經由膠體電泳分離的樣品中,含有特定序列的去氧核糖核酸片段。 通常,先利用膠體電泳分離去氧核糖核酸(DNA)樣本中各種不同大小的分子。不同大小的分子在膠體電泳之後,會分離而散佈在膠體上不同的位置。接著,這些DNA分子可以利用虹吸作用,轉染到一個薄膜上,經由DNA變性使它們的雙股分開。因為雙股DNA已經固定在…
蛋白.]] 西方墨點法()或稱「蛋白質轉漬法」、「免疫墨點法」()或「西式吸印雜交」,是在分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,也是HIV檢測的方法之一。 利用特定抗體能夠專一結合其抗原蛋白質的原理來對樣品進行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息,來分析檢測特定蛋白質的生物學檢測技術。 发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)。在尼尔·伯奈…
分离的蛋白质, 考马斯亮蓝染色法]] 蛋白质电泳()是根据蛋白质带电量或分子量的大小把不同的蛋白质分开,起到分离纯化的效果。根据带电量分离的叫“等电点电泳”(二維電泳),根据分子量分的是用“十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳”。后者的运用较广泛,与转膜技术,抗原抗体反应,和成像技术合起来就是分子生物学实验室常用的“蛋白质印迹法”(western blotting)。
介电泳()是电介质在非均匀电场中受力的现象。 这一力的存在不需要物体本身带电。所有粒子在电场环境里都存在介电泳现象,然而力的大小很大程度取决于物质和粒子的电学性质,粒子的形状和大小,以及场强变化率。 因此,特定频率的电场可以有选择性地控制特定粒子。它被应用于细胞的分离以及纳米粒子和纳米线的定向和控制。 參考文獻
电泳()是空间匀强电场作用下,分散粒子在流体中发生移动的现象。由于各物质的迁移速率有差别,故电泳是分离物质的常用方法。它又可分为: 移动界面电泳是不含支持物的电泳。溶质在自由溶液中泳动,故也称自由电泳,适用于高分子的检测,但不易完全分离。 区带电泳是含有支持物的电泳,支持物上混合样品被置于狭小的区带中泳动,分离出彼此分离的区带。支持物有很多种,由此又衍生出区带电泳的不同分支,例如聚丙烯酰胺凝胶电泳、纸电泳、等電位聚焦电泳、等速电泳、薄层…
等电位聚焦()是一种根据分子携带的电荷不同来分离分子的技术。等电位聚集通常在凝胶中进行。 分子会被集中在一个具有pH梯度的介质中,通过介质的电流将产生带正电荷的氧化极和带负电荷的还原极。带电分子会向相反电荷的一极运动,直到到周围pH值与其等电点相同时带电分子才停止在凝胶中运动。介质中的pH值梯度通常用脂肪族两性离子产生,这些药品需要在样品加入之前加入。 对于蛋白质的应用 由于蛋白质同时具有酸性基团和碱性基团,等电位聚焦法常常用于蛋白质的…
凝膠電泳,琼-{}-脂糖凝胶(洋菜膠)置于充满缓冲液的盒中,电源由后方施加电流。负极在远端(黑线),因此 DNA 向带正电的阳极(红线)迁移。]] 凝胶电泳(英语:Gel electrophoresis)或称胶体电泳,是一种用于大分子(如DNA、RNA、蛋白质)以及其碎片的分离、分析技术。该技术被科学工作者用于分离具有不同物理性质(大小、电荷、等电点)的分子。凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为预处理技术,在进行质谱、聚合酶链式反应、…
电色谱是分析化学、生物化学和分子生物学中的一种化学分离技术,用于分离大部分大型生物分子,例如蛋白质 。它是尺寸排除色谱法 (凝胶过滤色谱)和凝胶电泳的组合。这些分离机制基本上是沿着添加了轴向电场梯度的凝胶过滤柱的长度方向进行叠加的。 由于凝胶过滤机理,分子按大小分开,由于凝胶电泳机理,分子按电泳迁移率分开。 此外,还有二级色谱溶质保留机制。 毛细管电色谱 毛细管电色谱(CEC)是一种电色谱技术,其中液相流动相通过电渗作用通过包含色谱固定…
脈衝場凝膠電泳(,)是一種分離大分子DNA的方法。在普通的凝膠電泳中,大的DNA分子(>10kb)移動速度接近,很難分離形成足以區分的條帶。在脈衝場凝膠電泳中,電場不斷在兩種方向(有一定夾角,而不是相反的兩個方向)變動。DNA分子帶有負電荷,會朝正極移動。相對較小的分子在電場轉換後可以較快轉變移動方向,而較大的分子在凝膠中轉向較爲困難。因此小分子向前移動的速度比大分子快。脈衝場凝膠電泳可以用來分離大小從10kb到10Mb的DNA分子。
低分子量RNA型(low molecular weight RNA pattern, LMW-RNA pattern),又稱低分子量RNA指紋(LMW-RNA fingerprinting)是一種電泳技術,用來分離小分子量的RNA,如5S rRNA(107~131nt)、第二族tRNA(82~96nt)、第一族tRNA(72~79nt)等。 對於純菌株,tRNA和5S rRNA的指紋圖譜可用於鑒別基因型和分類(5S rRNA用於不同屬,…
離子導入法(Iontophoresis),又稱為離子電泳法,是利用連續性之直流電流,以同電性相斥的原理,將離子或帶電的化學藥物驅送至體內的治療方法。 歷史 早在十八世紀末期至十九世紀,就已經有在使用離子電泳法,只是當時人們還不知道這個就叫此名稱。一九零三年,LeDuc發現了離子電泳法,利用連續直流電,將生理所需的離子打入身體的表皮及黏膜組織內以達療效。 至今,此種療法從原本只物理治療用來止痛、消水腫等,變成現在熱門的美容、美白等相關皮膚…
毛細管電泳(Capillary electrophoresis)利用毛細管中被分析的帶電分子在電場作用下,因移動速率不同而達到分離不同分子的目的。 原理 毛細管電泳開始於20世紀60年代。在進行分析時將毛細管內充滿了電解液,毛細管兩端通高壓電,使電解液內帶電分子移到毛細管相反電荷的一端。因為不同分子的大小對電荷比不同,就以不同的速率在管中移動,達到毛細管終點也有快有慢。毛細管電泳既依此探測、分離不同分子。 儀器 毛細管電泳系統的主要部件…
双向凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis)是一種等电聚焦电泳与SDS-PAGE相结合,分辨率更高的蛋白质电泳检测技术。双向电泳后的凝胶经染色蛋白呈现二维分布图,水平方向反映出蛋白在等電點上的差异,而垂直方向反映出它们在分子量上的差别。所以双向电泳可以将分子量相同而等电点不同的蛋白质以及等电点相同而分子量不同的蛋白质分开。双向电泳是快速成长的蛋白质组学技术中最流行最通用的蛋白质分离方法。目前2D…
核糖體分型是一種分子生物學技術,可以區分相近的基因型,如不同種的細菌,比RFLP簡單。 步驟 首先對足夠量的DNA用限制性核酸内切酶進行酶切,隨後凝膠電泳分离不同長度的片段。電轉移到膜上(參見南方墨點法,此步可省),用標記的16S rRNA探針雜交。由於一個生物的基因組中通常有多個核糖體基因,分別存在於不同長度的酶切片段中,因此核糖體分型可以得到類似指紋的結果。