限制酶
限制酶()又稱限制內切酶或限制性內切酶,全稱限制性內切核酸酶,是一種能將雙股DNA切開的酶。它的切割方法是將醣類分子與磷酸之間的鍵結切斷,進而於兩條DNA鏈上各產生一個切口,且不破壞核苷酸與鹼基。切割形式有兩種,分別是可產生具有突出單股DNA的黏狀末端,以及末端平整無凸起的平滑末端。由於斷開的DNA片段可由另一種稱為DNA連接酶的酶黏合,因此染色體或DNA上不同的限-{制}-片段,得以經由剪接作用而結合在一起。 限制酶在分子生物學與遺傳…
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限制酶()又稱限制內切酶或限制性內切酶,全稱限制性內切核酸酶,是一種能將雙股DNA切開的酶。它的切割方法是將醣類分子與磷酸之間的鍵結切斷,進而於兩條DNA鏈上各產生一個切口,且不破壞核苷酸與鹼基。切割形式有兩種,分別是可產生具有突出單股DNA的黏狀末端,以及末端平整無凸起的平滑末端。由於斷開的DNA片段可由另一種稱為DNA連接酶的酶黏合,因此染色體或DNA上不同的限-{制}-片段,得以經由剪接作用而結合在一起。 限制酶在分子生物學與遺傳…
异裂酶()是指识别相同的核酸序列,但酶切位点不同的限制酶,在一些特殊的实验中有很大的应用价值。 例如: 限制酶 MaeII 的酶切位点为 A^CGT 限制酶 TaiI 的酶切位点为 ACGT^ 限制酶 ApaI 的酶切位点为 GGGCC^C 限制酶 Bsp120I 的酶切位点为 G^GGCCC 以及其它一些例子。 识别相同序列,酶切位点也相同的限制酶称为同裂酶。 参考文献
同裂酶()是指识别相同的识别序列,切割产生相同的粘性末端的限制酶。比如, SphI (CGTAC/G) 和 BbuI (CGTAC/G) 是一对同裂酶。通常同裂酶中第一个被发现的酶的名字会成为这个识别位点的名称。同裂酶通常来自不同的细菌系,因此需要不同的缓冲液体系。 识别相同的识别序列,但切割位点不同的限制酶称为异裂酶。比如 SmaI (CCC/GGG) 和 XmaI (C/CCGGG) 识别一样的序列,但切割位点相差两个碱基,互为异裂…
*EcoRI*(「I」是羅馬數字「1」)是一種核酸酶,來自某些特定品系的大腸桿菌(E. coli,也是其名稱由來),是此種細菌體內參與限制修飾系統的酶。 在分子生物學或其他分子層次的生物學研究上,EcoRI是一種常用的限制酶,可將特定序列的DNA切割成片段,切割後的小片段端點為5'端突出的黏狀末端。 參見 EcoRV FokI 參考文獻 Bitinaite, J., D. A. Wah, Aggarwal, A. K., Schildk…
XhoI是一種发现於黄单胞菌属細菌(Xanthomonas holcicola)的II型限制酶(),其识别序列为 5'CTCGAG 3'GAGCTC 切割产生的粘性末端为 5'---C TCGAG---3' 3'---GAGCT C---5' 參考文獻
FokI是一種存在於細菌Flavobacterium okeanokoites的type IIS限制酶,含有位於N端的DNA結合區塊(N-terminal DNA-binding domain),以及一個位於C端的非專一性DNA切割區塊。當此酵素與DNA辨識並結合於5'-GGATG-3'识别位点時,將會把位於結合位置下游的9到13個核苷酸切除(不需特定序列)。FokI的分子量為65.4 kDA,含有587個氨基酸。 參考文獻
TaqI是一種1978年发现於細菌水生棲熱菌()的II型限制酶,其识别序列为 5'TCGA 3'AGCT 切割产生的粘性末端为 5'---T CGA---3' 3'---AGC T---5' 參考文獻
同尾酶()是指一组识别序列不同,但切出的粘性末端相同的限制性內切酶。比如限制酶 Mbo I 和 BamH I 就是一对同尾酶: Mbo I NGATC N N CTAGN BamH I GGATC C C CTAGG N 代表任意四种核苷酸,表示 Mbo I 酶的切割不依赖于此处的碱基。在切割后,两种酶都生成了相同的四个碱基长度的粘性末端 - GATC。这使得两个DNA片段可以在退火的时候配对起来,再由DNA连接酶连接起来,可以通过这一…
*AaaI*是一種发现於細菌(Acetobacter aceti)的II型限制酶,其识别序列为 5'CGGCCG 3'GCCGGC 切割产生的粘性末端为 5'---C GGCCG---3' 3'---GCCGG C---5' 同裂酶 同样切割5'-CGGCCG-3'产生5'-C GGCCG-3'粘性末端的同裂酶有: BseX3I BstZI EagI EclXI Eco52I SenPT16I XmaIII 參考文獻
AvaI是一種发现於細菌多变鱼腥藻(Anabaena variabilis)的限制酶,与发现于地芽胞杆菌属细菌(Geobacillus stearothermophilus)的BsoBI为同裂酶,它们的识别序列为: 5'CYCGRG 3'GRGCYC 其中Y为任意嘧啶,R为任意嘌呤,切割产生的粘性末端为: 5'---C YCGRG---3' 3'---GRGCY C---5' 參考文獻
星活性(star activity),也称star活性,是一些限制性内切酶在特定条件下,在非原识别序列切割DNA的现象。星活性出现的频率与限制性内切酶、底物DNA和反应条件有关。在DNA重组时,星活性将导致在DNA切割反应中出现非特异性DNA片段,从而对DNA的连接与重组造成一定影响。一般通过降低反应系统中的甘油含量、调控pH值、使用高盐浓度等方法尽量排除产生星活性的条件。 参考资料 *楼士林、杨盛昌、龙敏南等 《基因工程》科学出版社 …
XbaI是一種发现於黄单胞菌属細菌(Xanthomonas badrii)的II型限制酶(),其识别序列为 5'TCTAGA 3'AGATCT 切割产生的粘性末端为 5'---T CTAGA---3' 3'---AGATC T---5' 參考文獻
NlaIII是一種发现於細菌(Neisseria lactamica)的II型限制酶,其识别序列为 5'CATG 3'GTAC 切割产生的粘性末端为 5'---CATG ---3' 3'--- GTAC---5' 同裂酶 同样产生5’-CATG-3’粘性末端的同裂酶有: Fael Fatl Hin1II Hsp92II CviAII IceA1 參考文獻
DpnII是一種发现於細菌肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae,当时称为“肺炎双球菌”,Diplococcus pneumonia,故缩写为Dpn)的II型限制酶,其识别序列为 5'GATC 3'CTAG 切割产生的粘性末端为 5'--- GATC---3' 3'---CTAG ---5' 參考文獻
NdeI是一種发现於細菌脱氮奈瑟菌(Neisseria denitrificans)的II型限制酶,其识别序列为: 5'CATATG 3'GTATAC 切割产生的粘性末端为 5'---CA TATG---3' 3'---GTAT AC---5' 參考文獻
PstI是一種发现於細菌(Providencia stuartii)的II型限制酶,其识别序列为: 5'CTGCAG 3'GACGTC 切割产生的粘性末端为 5'---CTGCA G---3' 3'---G ACGTC---5' 參考文獻
HpaII是一種发现於細菌(Haemophilus parainfluenzae)的II型限制酶(),其识别序列为 5'CCGG 3'GGCC 切割产生的粘性末端为 5'---C CGG---3' 3'---GGC C---5' 參考文獻
HindIII是一種发现於細菌流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae,故缩写为Hin)的II型限制酶,其识别序列为 5'AAGCTT 3'TTCGAA 切割产生的粘性末端为 5'---A AGCTT---3' 3'---TTCGA A---5' 參考文獻
BamHI(亦可寫作BamH1)是一種常用的II型限制性核酸內切酶。BamHI最早取自(Bacillus amyloliquefaciens)中 參考
*EcoRV(V是5的意思)是一種第二型限制內切酶,來自某些特定品系的大腸桿菌(Escherichia co*li),此細菌的學名也是EcoRV前三個字母的由來。 EcoRV是分子生物學與生物技術上常使用的限制酶,可辨識出一段含有6個鹼基的5'GAT|ATC-3'(|為切開的位置)DNA序列,以及互補的3'-CTA|TAG-5',以產生平整末端的方式將此序列切開。 參見 *EcoRI