即時聚合酶鏈式反應
即時聚合酶鏈式反應（）是一種在DNA擴增反應中，以螢光染劑偵測每次聚合酶鏈鎖反應（PCR）循環後產物總量的方法。 此實驗法已被眾多科學家採用，因為其偵測範圍廣、靈敏度高、準確、專一及快速。PCR的發展因為偵測感染病患的病毒（不過RNA病毒須先反轉錄成DNA才進行PCR）或細菌量、癌症監測、診斷個別基因差異的用藥反應等應用而大幅提高。 PCR的方法是基於偵測目標物在反應前及PCR後產物的量化關係，越早探測到指定螢光值表示目標基因組越多。相…
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遞減聚合酶鏈式反應
遞減PCR，亦稱降落PCR（）是一種PCR（聚合酶鏈式反應）方法，用來避免非特異性序列的擴增。PCR中引物的黏合溫度（）決定了黏合的特異性，溫度越高特異性越強，但過高則不能實現引物和模板的結合，而過低會產生大量非特異性產物。因此進行PCR時需要尋找合適的黏合溫度。 遞減PCR開始先設定一個比較高的黏合溫度，每個循環黏合溫度下降1℃，到一個較低溫度以後每個循環的黏合溫度保持不變直到結束。在剛下降到特異性結合可以進行的最高溫度時，可以達到最…
聚合酶链式反应
聚合酶連鎖反應（polymerase chain reaction，PCR）又稱聚合酶链反应、多聚酶链反應，是一项利用DNA双链复制的原理，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。透过这項技术，可在短时间内大量扩增目的基因（標的基因），而不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。DNA 体外扩增的实现首先基于DNA半保留复制原理，还有碱基互补配对原则，即复制的过程中双链DNA会解链，由双链变成单链，温度一般为95℃；之后温度降下来，引物会结…
数字聚合酶链式反应
数字聚合酶链式反应（数字PCR、dPCR或dePCR）。是对常规聚合酶链式反应方法的生物技术改良，可被用来直接定量和克隆扩增核酸。dPCR和qPCR的主要差异在于测量核酸的方法，前者比PCR更精确，但新手也更容易造成差错。 PCR每个样品进行一个反应。dPCR也是每个样品进行一个反应，但样品被分散成很多液滴而且反应在每个液滴里单独进行。这个分离可以更可靠地收集和更敏感地测量核酸含量。已经证明这个方法可以研究基因顺序的变异——比如拷贝数变…
循環數閾值
循環數閾值（，簡稱Ct值），是指在聚合酶链式反应（）測試当中，令螢光标记信号强度達到指定阈值所需要進行的循环次数，常常用作測量患者的病毒含量及其傳染性的指標。其值越低，则之前原始样本当中病毒浓度越高，反之则越低。 在進行聚合酶鏈式反應測試時，需要把患者體內的病毒基因放大才能偵測到病毒，循環數閾值是指需要把病毒基因放大多少才能偵測到病毒。假如患者的循環數閾值較低，即其樣本在聚合酶鏈式反應測試中，只需較少的時間與循環便可偵測到病毒，反映其病…
多重聚合酶鏈式反應
多重聚合酶链式反应（, Multiplex PCR）是指利用聚合酶链式反应同时扩增數个不同的DNA序列（像在同一個反应中進行许多单独的聚合酶链式反应）。该过程使用多个引子和溫度敏感的DNA聚合酶在循環熱儀裡複製樣品中的DNA。其中使用的的所有引子必须特別設計以符合相同的黏合溫度。 1988年，多重PCR首次被用來检测肌肉萎縮症基因缺陷的方法。它也被用來檢測類固醇硫酸酯酶 基因。 2008年，多重PCR技术開始被用來分析微卫星和SNP。2…
熱啟動聚合酶鏈式反應
熱啟動聚合酶鏈式反應（）是一種改良的聚合酶鏈式反應方法，主要用來避免操作過程中產生非特異性序列的擴增。將DNA聚合酶與其他反應物隔絕，或是使用在高熱狀況下才會活化的聚合酶，避免在未達到設定溫度前就開始反應。 熱啟動PCR有幾種方式： 蠟隔絕法：將除了聚合酶以外的反應物加入PCR管後，加滴熔融的石蠟；待石蠟凝固後再加入聚合酶。放入PCR儀開始反應升溫後，石蠟融化浮至最頂層，聚合酶才與其他反應物混合。石蠟可同時作為防止蒸發用。 熱啟動聚合酶…
逆轉錄聚合酶鏈式反應
-{逆}-轉錄PCR，或者稱反轉錄PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶鏈式反應(PCR)的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉錄成爲互補DNA，再以此爲模板通過PCR進行DNA複製。 由一條RNA單鏈轉錄爲互補DNA(cDNA)稱作“逆轉錄”，由依賴RNA的DNA聚合酶（逆轉錄酶）來完成。隨後，DNA的另一條鏈通過脫氧核苷酸、引物和依賴DNA的DNA聚合酶完成，隨每個…
重叠延伸聚合酶链式反应
重叠延伸聚合酶链式反应（英文：overlap extension polymerase chain reaction或OE-PCR），是PCR的一种，也称重合拼接PCR。它改变小DNA片段部分序列的来拼接成大的多聚核苷酸。本页面默认读者熟知聚合酶链式反应（PCR）。 DNA分子拼接 在大部分PCR反应中，每个DNA序列扩增需要一对引物。而拼接2个DNA序列，可以使用末端可以连接的特殊引物。设计引物使一个DNA分子的5' 端重复序列与另一…
巢式聚合酶链式反应
巢式聚合酶链式反应 （ Nested PCR ）是对聚合酶链式反应的一种改进，旨在减少意外引物结合位点的扩增导致的产物中的非特异性结合。 聚合酶链式反应 聚合酶链式反应本身是通过温度介导的DNA聚合酶扩增DNA样品的过程。该产品可用于测序或分析，该过程是许多遗传学研究实验室的重要组成部分，也用于法医和其他人类遗传病例的DNA指纹识别。常规PCR需要与靶DNA末端互补的引物。PCR产生的产物量随反应所经历的温度循环次数而增加。常见的问题是…
簡併引物
用於聚合酶鏈式反應的特殊引子，含有化學合成的特殊鹼基，能和多種鹼基配對。用於讓引子順利配對到鹼基稍有不同的DNA。 例如ATCGCCTGG引子表示能與TC結合的特殊鹼基。能和TAGCGAGACC，TAGCGGGACC這兩種稍有不同的DNA完全配對。