津浦铁路的运营自开通以来就一直繁忙。从整体运输量来看，该路货运比客运发达；其中，北段受海运和河运竞争，较为清淡，而南段因为深入内地，货源充足，有大量的大宗货物来往。
开通初期，运营方率先投入了当时具有世界先进水平的蓝钢列车，还圆满完成了孙中山的迎榇和奉安大典工作。货运方面，大量的大宗货物，例如徐州到贾汪的煤、利国驿的铁矿、淮北符离集的煤等，都会通过津浦铁路转运。另外，还有产自豫东、皖北的豆、麦、芝麻等农产品，也在此线上来往。
運輸能力
运行图
进入20世纪30年代，津浦铁路的列车开始按照运行图开行；日占时期，华北交通也组织天津等铁路局编制运行图，一般每年修订一次。运行图编制时间为当日0点至次日0点，确定编组、中转和停站时间及营业收支等内容，并在诸多车次中优先安排国际旅客快车和直达货物列车的车次。编制运行图时，机车使用能力留有5％的余地，以便机车检修；24小时内，单线和双线区段的通过能力分别留有20％和15％，以便调整运输秩序。1923年，津浦铁路局添置“兰钢皮”53辆，并行驶特别快车，运送旅客人数逐年上升
1997年，中国铁路将重点放在中长距离客运市场上，并开始提速改造，京沪铁路四等以下客运站停办客运业务。在1934-1936年，南京曾有经过栖霞山、镇江市，终到无锡的旅游列车，售往返票，有1日、2日、3日的选择。日军占领南京后，津浦铁路屡屡中断，客车也没有稳定的时刻表
车内服务
运营初期，客运列车上曾配有服务、餐茶、行李、检票、检车人员和防护队，头等、二等车厢配“车僮”服务旅客，特快列车的头等车厢还有“侍应生”，而三、四等车厢则配有1名车夫清扫车厢。30年代时，主要的列车上还有餐茶服务、中转服务和免费开水。到南京解放后，各次列车配列车长、列车员、行李员，负责旅客的安全、服务、清洁工作，以及负责报站。1951年，列车加装广播，并配有意见簿。同时，列车设立服务台，提供票务和简单的医务服务。由于列车乘务各工种的隶属、工作不统一、不协调，将多工种合为一体的乘务组被建立，形成客运、车辆、公安“三乘一体”的制度。乘务组统一由列车段领导，值乘中由列车在统一负责。1956年4月，铁道部颁布《列车包车办法》，南京铁路分局也制定了《乘务规范》和《服务手册》，统一了作业程序和服务的标准规范。1990年，T65/66次列车的208名乘务员被共青团江苏省委评为“共青团号”，也同时被评为“红旗列车”。
整车运输
运营初期，货运由货主自行负责。1932年7月，国民政府铁道部颁布《铁路货车负责运输细则》，明令津浦铁路实施铁路货物负责运输制度。9月1日起，浦口站开始实施整车货物负责运输。两个月后，津浦铁路全线施行负责运输制，包括整车和零担货物。负责运输制实施后，津浦铁路货运收入较同比增长54.2万元。。1912年11月全线通车，南北总局合并，在天津设津浦铁路总局，浦口设分局，隶属于北洋政府交通部，运输工作由津浦路局车务处、车务分段管理
侵华日军占领期间，津浦铁路由華中鐵道株式会社业务部管理徐州以南区间，而華北交通则管辖徐州以北区间
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