隨機引子標記

隨機引子標記(英文:Random-Primed Labeling)是種分子生物學技術,可用於在DNA探針上加上可作為訊號識別的標記。

步驟
先將欲標記探針片段加熱,使其變性雙股分離成單股,接著加入隨機引子並降溫使其和單股黏合(通常是hexonucleotides)。
再以Klenow片段將接有標記分子的dNTP如Digoxigenin(地高辛)、Biotin(生物素)或螢光分子如Cyanine用來合出互補股,就可得到摻有標記物的探針。

偵測
Digoxigenin之後可用Anti Digoxigenin(一級抗體)接合再以標有螢光酵素(HRP或AP)的Anti Digoxigenin Antibody(二級抗體)接合一級抗體,
並加入螢光酵素受質即可發出螢光,再以冷光儀或分光光度計測吸光值。

而Biotin可與接有螢光酵素的Streptavidin結合,並如同上面加入螢光酵素受質測吸光值。

參考資料

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