酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）又称酵素免疫分析法，簡稱酶联法、酶免，是利用抗原抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測的分析方法；由於結合於固體承載物(一般為塑膠孔盤)上的抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設計其鍵結機制後，配合酵素呈色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，並可利用呈色的深淺進行定量分析。

酶联法的一项重要应用为用于HIV检测，其检测的蛋白一般为HIV的p24蛋白 ()。根據待測樣品與鍵結機制的不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法（）、間接法（）、以及競爭法（）三種為主。

三明治法
三明治法常用於檢測大分子抗原，一般之操作步驟為:

將具有專一性之抗體固著（）於塑膠孔盤上，完成後洗去多余抗體

加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

洗去多餘待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進行鍵結

洗去多餘未鍵結一次抗體，加入帶有-{zh-hans:酶;zh-tw:酵素;}-之二次抗體，與一抗鍵結

洗去多餘未鍵結二次抗體，加入-{zh-hans:酶底物;zh-tw:酵素受質;}-使-{zh-hans:酶;zh-tw:酵素;}--{zh-hans:显;zh-tw:呈;}-色，以肉眼或儀器讀取-{zh-hans:显;zh-tw:呈;}-色結果

三明治法分別以兩種抗體對檢體中的抗原進行兩次專一性辨認，因此專一性相當高，但此待測抗原必須是多價抗原，如此才可獲得兩種以上的專一性抗體，以分別進行夾心；而且此法需要足夠的表位空間以進行抗原抗體的夾心，所以並不適用於半抗原或小分子抗原等分子量較小之標的。

間接法
間接法常用於檢測抗體，一般之操作步驟為：

將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘之抗原

加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結

洗去多餘待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結

洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。

競爭法
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用於檢測小分子抗原，其操作步驟為：

將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體

加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由於塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。

洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著於孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

註釋
外部連結
*[http://consumer.fda.gov.tw/files/GMO/images/flash/pcr2.swf ELISA原理之動畫]

[https://www.avivasysbio.com/sd/category/elisa/elisa_tips_tricks.phtml ELISA Tips & Tricks]
[http://www.gentaurpub.com/elisa-kits/ZWxpc2Ega2l0cw==.html More publications about ELISA kits]
[https://web.archive.org/web/20221123112222/http://www.elispot-analyzers.de/english/elisa-animation.html An animated illustration of an ELISA assay]
[http://www.elisakits.co.uk/trouble-shooting-faq Trouble shooting ELISA FAQ]
[https://www.mabtech.com/knowledge-center/assay-principles/elisa-assay-principle The ELISA technique illustrated]
[http://www.sumanasinc.com/webcontent/animations/content/ELISA.html An animated tutorial comparing the direct and indirect ELISA methods]
[http://www.biology.arizona.edu/immunology/activities/elisa/main.html "Introduction to ELISA Activity – beginner walkthrough of ELISA used for detecting HIV, including animations] at University of Arizona

*[https://web.archive.org/web/20130128210201/http://www.whfreeman.com/catalog/static/whf/kuby/content/anm/kb07an01.htm A descriptive animation of the application of sandwich ELISA to Pregnancy test]
*[http://www.piercenet.com/method/overview-elisa#elisaformats Animated video overview of competitive ELISA formats]
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酶联免疫吸附测定